CONCLUSION FINAL DE LA UNIDAD NUMERO 9

Como conclusión final, puedo afirmar que se cumplió con el objetivo planteado de la unidad, ya que en el transcurso de los temas entendimos las bases moleculares del intercambio del material genético entre los diferentes seres vivos para su aplicación.

Conocimos que existen varios mecanismos comunes de transferencia de genes los cuales fuimos viendo en cada clase.

Primordialmente para entender los mecanismos repasamos algunas generalidades básicas de las bacterias, como sus características, morfología, estructura, entre otras cosas, partiendo de ahí ahora si vimos principalmente los mecanismos de reproducción en bacterias, entre ellos los mecanismos de transferencia natural, en los que se encuentran: La transformación que cuando en determinadas condiciones fragmentos de ADN exógeno o ADN transformante con estructura helicoidal intacta pueden unirse a células bacterianas competentes y entrar en su interior. Otro mecanismo que vimos fue conjugación que es cuando una bacteria donadora transmite a través de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora, otro mecanismo que vimos fue la transducción que es cuando se trasfiere ADN de célula donadora a otra receptora mediante partículas de bacteriófagos que contienen ADN genómico de la primera, vimos también la recombinación que es cuando una bacteria receptora recibe genes de otra bacteria donadora, y por ultimo vimos el mecanismo de transfección que son técnicas que se han desarrollado fundamentalmente para permitir la introducción de ácidos nucleícos en el interior de las células.

Así como también aprendimos que existen  mecanismos de transferencia artificial, que se clasifican en Físicos y Químicos, en los químicos encontramos unas técnicas como la microinyección con una fina aguja de cristal y la electroporación que es una exposición de las células aun choque eléctrico y en los mecanismos químicos estudiamos algunos métodos que fueron: El Método del fosfato cálcico, Método del DEAE dextrano, Método DNA desnudo, Método Péptidos fusiogénicos, Método  de Liposomas.
Esta fue una de las unidades menos complicadas por las que no presente muchos problemas, y a manera futura, ya presento con algunos conocimientos sobre cuales son aquellos métodos de transferencia del material Genetico.

9.2.2 QUÍMICOS

Están basadas en la formación de complejos que las células sean capaces de adquirir e incorporar, bien sea directamente mediante la ruta endocítica fosfato cálcico, DEAE dextrano o a las membranas lipofección

Uno de los campos de estudio más importantes de las técnicas de transferencia de genes, son los estudios realizados con los llamados vectores sintéticos también usados en técnicas de terapia génica, con tal de evitar los problemas derivados de la utilización de virus para la transferencia de genes.

Método del fosfato cálcico:

Basado en la obtención de un precipitado entre el cloruro de calcio y el DNA en una solución salina de fosfatos. Aparentemente el agregado con calcio protege al DNA de la degradación por las nucleasas celulares. El tamaño y la calidad del precipitado es crítico para el éxito del proceso, que se ve afectado por factores tales como pequeños cambios en el pH de la solución.

                         

                                                                 

Método del DEAE dextrano:

Basado en la obtención de complejos entre la resina DEAE y el DNA. Los polímeros de DEAE dextrano o polybreno tienen una carga que les permite unirse a las muy negativamente cargadas moléculas de DNA. El DNA acomplejado se introduce en las células mediante choque osmótico mediante DMSO o glicerol. El uso de DEAE dextrano se limita a las transfecciones transientes. 

Método DNA desnudo:

Técnica basada en fase altamente experimental es incapaz de entrar en una célula y aún consiguiendo entrar en ellas es rápidamente degradado. La línea de investigación busca incorporar esas secuencias de DNA a un transportador, que le encierra y le lleva hasta la célula Diana en dónde a través de interacciones de membrana se asocia con ella para entregar el material al interior.
Los problemas que encontramos son que el DNA por ser estructura polar  tiene muchas dificultades para cruzar la membrana plasmática. Además el DNA codificante para  1 gen es aproximadamente de 10 kb, esto representa la longitud aproximada de una célula, en el caso de encontrar el DNA sin ningun tipo de compactación. 

                                

Método Péptidos fusiogénicos:

Los  péptidos fusiogénicos surgen en una línea de trabajo que nos permita paliar aquellas características del DNA desnudo que nos impiden la entrada.

Estos péptidos fusiogénicosa se utilizan para compactar DNA. y de este modo adoptan DNA con proteínas ricas en cargas +, del tipos Histonas. Esto supone una condensación considerable, ya que el DNA aparece en la forma de partículas de 50-150 nanometros, pero sólo un cierto grado de condensación permite que 1 transportador incluya 1 molécula de DNA. Asimismo la reducción de tamaño del DNA hasta unos 20 nanometros facilitaría el paso a la célula y hasta el núcleo, incrementando su protección contra las nucleases citoplasmáticas. En el proceso de penetración celular, los transportadores sintéticos (si su carga neta es +) interactuan con Aminoazucares de la Membrana plasmáticacon (carga -) para producir la incorporación a la célula en forma de endosomas. Por tanto tenemos un problema más a superar.

                                        

Método  de Liposomas:

Los liposomas estan formados por DNA y lípidos no inmunogénicos cargados positivamente lípidos cationicos.

Se empezó a trabajar con lípidos no inmunogénicosados, ya que la organización de los lípidos en bicapa podría facilitar el paso a través de la membrana citoplasmática. Aunque estos lípidos no englobaban mucho DNA.
A raiz de esto se crearon los liposomas que superan el problema de la compactación debido a que el DNA se contornea como consecuencia de las cargas positivas de lípidos (en los liposomas DNA está ocho veces más condensados que en  lípidos normales). Además se pretende controlar su destino mediante proteinas en membrana de liposoma. Una característica en común con la anterior es que se forman de forma espontanea si se colocan los dos en un mismo medio.

Bibliografía:

Metodos quimicos para la transformacion de plantas. Bayardo parra alferez cod. 90022151141  facultad de ciencias basicas biotecnologia vegetal